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如何正確使用ATCC細胞?

更新時間:2023-02-26 點擊次數:348
  ATCC細胞的原理在不加任何條件下直接凍存細胞時,細胞內和外環境中的水都會形成冰晶,能導致細胞內發生機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等,能引起細胞死亡。如向培養液加入保護劑,可使冰點降低。在緩慢的凍結條件下,能使細胞內水份在凍結前透出細胞。貯存在-130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。
  細胞復蘇時速度要快,使之迅速通過細胞最易受損的-5~0℃,細胞仍能生長,活力受損不大。目前常用的保護劑為二甲亞砜(DMSO)和甘油,它們對細胞無毒性,分子量小,溶解度大,易穿透細胞。
  ATCC細胞的使用方法:
  1、您收到細胞后,請按照以下方法進行操作:
  取出25cm2培養瓶,75%酒精擦拭培養瓶,放入37℃,5%CO2細胞培養箱中靜置4-6小時或隔夜,以穩定細胞狀態。然后,用75%酒精擦拭培養瓶,拆下封口膜,收集瓶內液體于50ml離心管中,1000rpm離心5min,棄上清,用6ml培養基重懸,全部接種到25cm2培養瓶中,再放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養。如果離心后細胞量很多,可以直接1:2分瓶培養。
  2、細胞傳代:細胞生長至覆蓋培養瓶的85%及以上面積時,收集瓶內液體于15ml離心管中,1000rpm離5min,棄上清,用12ml培養基重懸細胞,按1:2的比例進行接種傳代,接種到25cm2培養瓶中,放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養,2-3天更換培養液。換液的步驟同細胞NK-92細胞,ATCC細胞,培養技術傳代步驟。
  3、細胞凍存:
  a、細胞生長至覆蓋培養瓶的85%及以上面積時,收集瓶內液體于15ml離心管中,1000rpm離心5min,棄上清,用適當量的凍存液(基礎培養基:FBS:DMSO=5:4:1)重懸細胞,并放置于凍存管中。
  b、先將細胞凍存管放置于4℃0.5h,再放置于-20℃1.5h,然后將其移入-80℃隔夜,24h后可轉入液氮中進行長期保存。
  4、ATCC細胞復蘇:
  a、從液氮中取出細胞凍存管,快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。
  b、將凍存管中的細胞移至含有5ml培養液的15ml離心管中,然后1000rpm/min,離心5min。
  c、棄上清,沉淀細胞用6ml培養基重懸,接種到培養瓶中,最后放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養。
  d、第二天,換用新鮮培養基繼續培養。

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